Resultados do PCQAUTO 10ª Rodada.
21/05/2009
O soro da décima rodada do PCQAUTO apresentou um padrão predominantemente nuclear pontilhado, sem coloração de nucléolo ou de figuras mitóticas, porém com algumas peculiaridades adicionais que tornaram esta amostra uma das mais difíceis de leitura até o presente em nosso programa. Esta característica ficou demarcada pelo intenso uso do campo para comentários adicionais pelos participantes.
As minhas considerações finais desta rodada para apreciação dos participantes:
1) Apenas 5% dos técnicos postaram resultado negativo nesta rodada, uma melhora significativa em relação à amostra da nona rodada (que teve acima de 30% de resultados negativos).
2) Os títulos variaram de 1:160 a 1:2.560. Em torno de 30% dos participantes postaram títulos de 1:320 ou 1:640 cada (maior frequência encontrada). Em nosso laboratório o padrão predominante, após uso de vários substratos HEp-2 comerciais distintos, foi compatível com nuclear pontilhado tipo pontos isolados, menor que 10 pontos, em título de 1:2.560.
3) A grande maioria dos participantes (78%) encontrou padrão nuclear tipo pontos isolados, com algum posicionamento díspar em relação ao número de pontos (menor ou maior que 10 pontos isolados). Dentre todos os participantes com resultados positivos, 61% preferiram o padrão menor que 10 pontos em seu resultado definitivo. Uma minoria de técnicos colocou como resultado final da amostra o padrão pontilhado fino ou o padrão pontilhado fino denso. Não houve participantes com descrição de padrões citoplasmático, nucleolar ou do aparelho mitótico.
4) Os consultores internacionais viram padrão nuclear pontilhado como predominante, em co-localização com soro padrão positivo para anti-p80 coilina. A presença deste auto-anticorpo foi confirmada por western blot, com banda co-migrando em mesma posição que o soro controle positivo. Um dos consultores viu, na titulação de 1:40, um padrão citoplasmático adicional em posição peri-nuclear. A 1:800 relatou que o padrão misto citoplasmático com acentuação peri-nuclear e nuclear com pontos isolados permanecia presente, como nas baixas titulações, porém também com a definição nova de um padrão tipo membrana nuclear descontínua. Outro consultor internacional viu ainda um segundo padrão nuclear e padrão citoplasmático, porém não os definiu porque mais fracos na sua leitura. Nem meus ensaios em Porto Alegre nem os diversos ensaios dos participantes desta rodada postaram dados relativos à presença de padrão citoplasmático.
5) Nos testes adicionais à imunofluorescência viu-se o seguinte:
a. Western blot com banda compatível com anti-p80 coilina, além
de outras bandas adicionais (ver figura 1).
b. Pelo menos algumas destas bandas adicionais podem se dever à
presença de auto-anticorpos contra componentes do nucleossomo, como
visto em teste Euroline (ver figura 1). Como estas reatividades não
se deram contra histonas, é bem provável que se trate da presença
de anticorpos contra proteinas tipo HMG ("high mobility group").
Estes auto-anticorpos estariam na base do segundo padrão nuclear
(homogêneo) observado pelos consultores internacionais,
principalmente em baixos títulos.
c. Outros testes mostraram que este soro não reage com antígenos
tipo PM/Scl, fibrilarina, topoisomerase I (Scl70) e outros tantos
(figura 1).
6) No painel da figura 1 vemos testes de meio sólido com o soro do PCQAUTO 10 e, no painel da figura 2, os achados de imunofluorescência em células HEp-2.
7) Infelizmente não conseguimos dados clínicos deste paciente com o laboratório conveniado, o qual referendou o soro.
A B
Figura 1 - Em A, banda co-migrando com nucleossomas em ensaio de line blot (Euroimmun), com anti-histonas não presentes na amostra. Em B, western blot demonstrando co-migração com soro padrão anti-p80 coilina, além de inúmeras outras bandas no soro do PCQAUTO 10
A B C
Figura 2 - Em A (FITC) observa-se um padrão nuclear de pontos isolados, menor que 10 pontos por núcleo, sobre um padrão nuclear homogêneo de coloração muito leve. Citoplasma, nucléolos e figuras mitóticas negativas. Em B o mesmo campo em coloração com DAPI para cromatina. Em C a junção das imagens de A e B.
Suas dúvidas, sugestões e questionamentos gerais sobre esta rodada podem ser enviados diretamente para cavm49@hotmail.com. Agradeço sua participação efetiva no PCQAUTO, e espero que o programa esteja sendo de importante auxílio em sua rotina laboratorial.
Dr. Carlos Alberto von Mühlen
Reumatologista e Patologista Clínico.
